Nhiễm trùng đường hô hấp cấp tính là các bệnh hô hấp phổ biến ở trẻ em, thường là do virus gây ra. Virus hợp bào hô hấp (RSV) và adenovirus hô hấp (ADV) là hai mầm bệnh phổ biến gây nhiễm trùng đường hô hấp cấp tính ở trẻ em. Các trường hợp nhẹ có thể gây ra các triệu chứng lạnh thông thường như ho và chảy nước mũi, trong khi các trường hợp nặng có thể gây ra các biến chứng nghiêm trọng như viêm phổi và viêm tai giữa. Theo các khuyến nghị của Tổ chức Y tế Thế giới, việc phát hiện mầm bệnh cần phải nhanh chóng, chính xác, nhạy cảm và cụ thể và không nên dựa vào các kỹ thuật viên chuyên ngành hoặc các công cụ lớn. Do đó, điều đặc biệt quan trọng là phát triển một phương pháp phát hiện cho RSV và ADV có thể đáp ứng các yêu cầu phát hiện trên.
Nhóm nghiên cứu của Giám đốc Ma Dongli của Viện Nhi khoa của Bệnh viện Trẻ em Thâm Quyến đã xuất bản một bài báo "Một xét nghiệm khuếch đại polymerase recombinase đa dạng kết hợp với CRISPR/ CAS12A để phát hiện virus hợp bào hô hấp và báo cáo"
Tổng quan nghiên cứu
Công nghệ khuếch đại axit nucleic nhanh chóng đẳng nhiệt đa enzyme miRA được kết hợp với hệ thống phát hiện CRISPR/CAS. Bằng cách thiết kế các đoạn mồi MIRA và CRISPR RNA (CRRNA), thực hiện so sánh nhiều chuỗi, tối ưu hóa các điều kiện phản ứng và sử dụng các thiết bị phát hiện số huỳnh quang để xác minh độ nhạy và độ đặc hiệu.
Và sử dụng kết quả qPCR làm kiểm soát so sánh, tính nhất quán của kết quả xét nghiệm của 160 mẫu tăm bông lâm sàng đã được nghiên cứu.
Kết quả thí nghiệm
1. Độ nhạy và độ đặc hiệu của phương pháp phát hiện MIRA-CRISPR/CAS12A
Trong phát hiện phương pháp MIRA, cặp mồi RSV-F1/R1 được sử dụng để khuếch đại axit nucleic từ các mẫu tăm bông của cổ họng của RSV, ADV, PIV, RHV, MP, CP, Flub, HMPV, FLA hoặc RSV/ADV. Ngoại trừ RSV và ADV, có các dải khuếch đại, các kết quả khác là âm, cho thấy các mồi MIRA được chọn không phản ứng chéo với tám mầm bệnh khác được thử nghiệm và được bảo tồn tốt.
Sau đó, các plasmid tái tổ hợp RSV và ADV đã được pha loãng 10 lần sử dụng nước vô trùng và giới hạn phát hiện cho RSV và ADV đều là 106bản sao/ml.
.
2. So sánh với qPCR
So với phương pháp qPCR, giới hạn phát hiện của RSV và ADV đều là 103 bản
(Độ nhạy của phát hiện qPCR của RSV và ADV)
Phương pháp MIRA-CRISPR phù hợp hơn với các phòng thí nghiệm cơ sở, với thời gian phát hiện ngắn, hoạt động đơn giản và không cần các công cụ qPCR quy mô lớn để hoàn thành các hoạt động thử nghiệm.
3. So sánh các mẫu lâm sàng
Các mẫu da cổ họng được thu thập từ 160 trẻ bị nhiễm trùng đường hô hấp cấp tính. Đồng thời, phương pháp MIRA-CRISPR và phương pháp qPCR đã được sử dụng để phát hiện và kết quả được so sánh với kết quả thử nghiệm lâm sàng.
So với phương pháp qPCR, độ nhạy của phương pháp MIRA-CRISPR đối với RSV và ADV lần lượt là 98,1% và 91,4% và độ đặc hiệu phát hiện là 1 0 0%. Giá trị kappa lớn hơn 0,95, cho thấy mức độ nhất quán cao.
Phương pháp MIRA-CRISPR có những ưu điểm của việc phát hiện RSV và ADV nhanh chóng, nhạy cảm và cụ thể. Nó có thể phát hiện nhiễm trùng virus kịp thời và chính xác, và phù hợp hơn để sử dụng ở các khu vực có tài nguyên y tế khan hiếm.