Staphylococcus haemolyticus là một loại vi khuẩn âm tính coagulase tích cực gram dương rất phổ biến trong các bệnh viện. Trong những năm gần đây, nhiễm trùng bệnh viện đã nhận được sự chú ý ngày càng tăng do nguy cơ cao hơn. Staphylococcus haemolyticus có thể gây nhiễm trùng da, viêm màng não, viêm phúc mạc và thậm chí nhiễm trùng huyết. Sự chậm trễ trong chẩn đoán lâm sàng có thể dẫn đến tình trạng sức khỏe xấu đi, vì vậy chẩn đoán nhanh chóng S. haemolyticus là chìa khóa để điều trị chính xác.
Nhóm nghiên cứu của giáo viên Ji Tuo từ Khoa Phòng thí nghiệm Trung ương của Bệnh viện Nhân dân thứ hai Lianyungang, Trung Quốc đã xuất bản một bài báo "Phát hiện nhanh chóng và trực quan của Staphylococcus haemolyticus trong các mẫu lâm sàng với MIA-LFS" trong tạp chí "Analytica Chimica Acta", với tác động của 6.2.
1.Research Tổng quan
Trong nghiên cứu này, một phương pháp Mira-LFS dựa trên gen MVAA đã được thiết lập để phát hiện Staphylococcus haemolyticus. Công nghệ khuếch đại axit nucleic nhanh chóng đẳng nhiệt đa enzyme MirA được kết hợp với các LFS kiểm tra dòng chảy bên để đạt được sự phát hiện mầm bệnh nhanh chóng.
Thí nghiệm được thực hiện ở 37 độ và kết quả có thể được phát hiện trong vòng 9 phút. Độ nhạy phát hiện là 0. 147cfu/phản ứng.
Phương pháp phát hiện MIRA-LFS phù hợp để phát hiện điểm cố định của Staphylococcus hemolyticus trong các mẫu lâm sàng, nhận ra phương pháp POCT để xác định Staphylococcus hemolyticus, có giá trị lớn để chẩn đoán và điều trị bệnh nhanh trong các khu vực có dịch vụ y tế không được giám sát.
Nhóm nghiên cứu đã sử dụng các phương pháp nuôi cấy vi khuẩn Mira-LFS, qPCR và truyền thống để phân tích 95 mẫu lâm sàng ngẫu nhiên và xác nhận khả năng áp dụng lâm sàng.
2.Research Phương pháp
Sơ đồ của phát hiện Mira-LFS được hiển thị ở trên.
Nghiên cứu đã sử dụng bộ khuếch đại nhanh chóng DNA của AMP-Future Biotech (loại dải thử nghiệm vàng keo) và dải thử nghiệm phát hiện axit nucleic.
Độ dài mồi gen MVAA là 30-35 nucleotide và độ dài sản phẩm khuếch đại là 100-350 bp. Tổng cộng có 6 cặp mồi ứng cử viên đã được thiết kế. Phân tích MIRA được thực hiện bằng GDNA của các chủng Staphylococcus hemolyticus tiêu chuẩn, các mồi ứng cử viên đã được sàng lọc và các sản phẩm khuếch đại được hiển thị bằng cách sử dụng điện di gel agarose 2%.
Sau đó thiết kế đầu dò dựa trên trình tự mồi phía trước (kéo dài 16 bp ngược). Đầu 5 'của đầu dò được dán nhãn FITC và đầu 3' được dán nhãn chặn C3. Sử dụng THF để thay thế 31 nucleotide trong đầu dò. THF là 30 bp từ đầu 5 'và 15 bp từ đầu 3'. Đầu 5 'của mồi ngược được chọn được dán nhãn biotin.
Hơn nữa, nhóm nghiên cứu đã tối ưu hóa các điều kiện phản ứng để phát hiện Mira-LFS của Staphylococcus hemolyticus. Kiểm tra ở 37 độ trong khoảng thời gian 2 phút từ 4 đến 12 phút. Các kết quả được hiển thị ở thời gian phản ứng 8 phút và đường kiểm tra có thể thấy rõ. Ngoài ra, các thử nghiệm được thực hiện ở các khoảng 5 độ từ 22-52. 37-42 độ là nhiệt độ phù hợp nhất để phát hiện Mira-LFS. Do đó, thời gian và nhiệt độ phản ứng tối ưu của phương pháp MIRA-LFS đối với Staphylococcus haumolyticus lần lượt là 8 phút và 37 độ. Cùng với kết quả cuối cùng được hình dung bởi LFS trong vòng 1 phút, tổng thời gian phát hiện là 9 phút.
3. Kết quả ngoại lệ
Xác minh độ nhạy
Xét nghiệm Mira-LFS được thực hiện trên các nồng độ DNA bộ gen khác nhau (GDNA) thu được từ nuôi cấy Staphylococcus haemolyticus pha loãng huyết thanh (1 0^6-10^0 cfu/ml).
Phân tích hồi quy đơn vị xác suất cho thấy 95% LOD được xác định bởi xét nghiệm Mira-LFS là 0. 147 CFU/phản ứng.
Xác minh tính đặc hiệu
Bằng cách phân tích 18 chủng vi sinh vật gây bệnh phổ biến và 15 chủng Staphylococcus haemolyticus lâm sàng, tính chọn lọc của phát hiện Mira-LFS của Staphylococcus haemolyticus đã được xác định. Kết quả cho thấy xét nghiệm Mira-LFS âm tính với 18 vi khuẩn gây bệnh khác và dương tính với 15 mẫu lâm sàng được xác minh của Staphylococcus haemolyticus.
Phát hiện Mira-LFS có tính chọn lọc cao và phù hợp để sàng lọc Staphylococcus hemolyticus.
Kiểm tra mẫu thực tế
Bệnh viện người thứ hai Lianyungang đã thu thập ngẫu nhiên 95 mẫu vật, bao gồm 35 mẫu da và mô mềm, 16 mẫu nước tiểu, 14 mẫu đờm và 30 mẫu máu.
Kết quả cho thấy phương pháp phát hiện phù hợp 100% với phương pháp qPCR. Ngoài ra, so với tiêu chuẩn vàng (GB/T4789. 11-2003), độ nhạy và độ đặc hiệu của phương pháp phát hiện MIRA-LFS để xác định nhiễm trùng staphylococcus hemolyticus lần lượt là 100% và 98,73%. Những kết quả này đã xác minh thêm tính khả thi kỹ thuật của phương pháp này trong việc phát hiện Staphylococcus hemolyticus trong các mẫu lâm sàng.
Phương pháp Mira-LFS được sử dụng để phát hiện POCT nhanh chóng của Staphylococcus hemolyticus. Nó hiệu quả, chính xác, đơn giản và chi phí thấp, và giúp đưa ra các quyết định chẩn đoán và điều trị nhanh chóng.
Tìm hiểu về công nghệ Mira
Công nghệ khuếch đại axit nucleic đa năng đa enzyme của AMP-Nucleic khuếch đại axit nucleic ở nhiệt độ không đổi 39 độ -42 độ, với thời gian phản ứng chỉ 5-20 phút. Ngoài ra, các điều kiện phòng thí nghiệm nghiêm ngặt là không cần thiết và các kịch bản ứng dụng được đa dạng hóa: Phòng thí nghiệm bệnh viện đa khoa, chăm sóc chính, kiểm tra nhà, lĩnh vực, v.v.
Các hình thức sản phẩm thuốc thử rất đa dạng: bột khô, microspheres đông khô, v.v .; Kết quả hiển thị rất đa dạng: điện di gel, đường cong huỳnh quang, dải thử vàng keo, v.v ... Thuốc thử có hiệu suất ổn định, dễ vận hành và thuận tiện cho việc lưu trữ và vận chuyển.
Với Mira là công nghệ nền tảng cốt lõi, nó đã phát triển một loạt các sản phẩm hỗ trợ như "Công nghệ giải phóng axit nucleic cực nhanh", "Máy dò huỳnh quang đẳng nhiệt kênh kép", "tích hợp hệ thống phát hiện đóng kín hoàn toàn tự động", "Thiết bị phát hiện axit nucleic tự thử nghiệm", v.v.