Staphylococcus haemolyticus là một loại vi khuẩn âm tính coagulase tích cực gram dương rất phổ biến trong các bệnh viện. Trong những năm gần đây, đã có nhiều lo ngại do nguy cơ nhiễm trùng bệnh viện cao. Staphylococcus haemolyticus có thể gây nhiễm trùng da, viêm màng não, viêm phúc mạc và thậm chí nhiễm trùng huyết. Sự chậm trễ trong chẩn đoán lâm sàng có thể dẫn đến sự suy giảm trong tình trạng sức khỏe, do đó chẩn đoán nhanh chóng Staphylococcus haemolyticus là chìa khóa để điều trị chính xác.
Nhóm nghiên cứu của Giáo sư Ji Tuo từ Khoa Phòng thí nghiệm Trung ương của Bệnh viện Nhân dân Lianyungang thứ hai đã xuất bản một bài báo "Phát hiện nhanh chóng và trực quan về Staphylococcus haemolyticus trong mẫu vật lâm sàng với Mira-LFS" trong tạp chí "Analytica Chimica Acta", với yếu tố tác động là 6.2.
Tổng quan về nghiên cứu
Trong nghiên cứu này, nhóm của Giáo sư Ji Tuo đã thiết lập một phương pháp để phát hiện staphylolyticus haemolyticus bằng mira-lfs dựa trên gen MVAA và sử dụng công nghệ khuếch đại axit nucleic nucleic nhanh chóng được kết hợp với dòng chảy nhanh. Thí nghiệm được thực hiện ở 37 độ và kết quả được phát hiện trong vòng 9 phút với độ nhạy phát hiện của 0. 147 CFU/phản ứng. Phương pháp phát hiện MIRA-LFS phù hợp để phát hiện điểm cố định của Staphylococcus haemolyticus trong các mẫu lâm sàng và nhận ra phương pháp xác định Staphylococcus haemolyticus bằng POCT, có giá trị lớn đối với chẩn đoán nhanh và điều trị các bệnh ở các khu vực không được bảo vệ. Nhóm nghiên cứu đã sử dụng Mira-LFS, qPCR và phương pháp nuôi cấy vi khuẩn truyền thống để phân tích 95 mẫu lâm sàng ngẫu nhiên và xác nhận khả năng áp dụng lâm sàng.
Phương pháp nghiên cứu
Một sơ đồ sơ đồ của thử nghiệm MIRA-LFS được hiển thị ở trên. Trong nghiên cứu này, bộ khuếch đại nhanh chóng không đổi DNA của AMPFuture Biotech (loại dải thử nghiệm vàng keo) và dải thử nghiệm phát hiện axit nucleic đã được sử dụng.
Độ dài mồi của gen MVAA là 30-35 nucleotide và độ dài của sản phẩm khuếch đại là 100-350 bp và tổng cộng 6 cặp mồi ứng cử viên đã được thiết kế. GDNA của các chủng Staphylococcus Staphylolytic tiêu chuẩn được sử dụng để phân tích MIRA, các mồi ứng cử viên đã được sàng lọc và các sản phẩm được khuếch đại được hình dung bằng điện di gel 2% agarose.
(Các sản phẩm khuếch đại được hiển thị bằng điện di gel agarose)
Đầu dò sau đó được thiết kế theo trình tự mồi phía trước (16 bp ngược). Đầu 5 'của đầu dò được dán nhãn FITC và đầu 3' được dán nhãn C3. Nucleotide vị trí 31- trong đầu dò được thay thế bằng THF ở khoảng cách 30 bp từ đầu 5 'và 15 bp từ đầu 3'. Đầu 5 'của mồi ngược được chọn được dán nhãn biotin.
(Sơ đồ sơ đồ biến đổi chéo và sửa đổi trình tự của các kết hợp đầu dò mồi)
Ngoài ra, các điều kiện phản ứng để phát hiện MirA-LFS bởi Staphylococcus haemolyticus đã được tối ưu hóa. Các thử nghiệm được thực hiện ở 37 độ từ 4-12 phút trong khoảng thời gian 2 phút. Các kết quả được hiển thị trong thời gian phản ứng 8 phút và dòng thử nghiệm có thể thấy rõ. Ngoài ra, thử nghiệm được thực hiện từ 22-52 độ ở các khoảng 5 độ. 37-42 độ là nhiệt độ phù hợp nhất để phát hiện Mira-LFS. Do đó, thời gian và nhiệt độ phản ứng tối ưu của phương pháp MIRA-LFS đối với Staphylococcus haumolyticus lần lượt là 8 phút và 37 độ. Cùng với thực tế là kết quả cuối cùng được hình dung bởi LFS trong vòng 1 phút, tổng thời gian phát hiện là 9 phút.
(Tối ưu hóa thời gian và nhiệt độ phản ứng)
Kết quả thí nghiệm
1. Xác minh độ nhạy
Nồng độ khác nhau của DNA bộ gen (GDNA) thu được từ các pha loãng nối tiếp của nuôi cấy Staphylococcus haemolytica (1 0^6-10
(Tín hiệu dương ở các nồng độ khác nhau)
Phân tích hồi quy đơn vị xác suất cho thấy 95% LOD được xác định bởi xét nghiệm Mira-LFS là 0. 147CFU/phản ứng.
(Giới hạn tính toán phát hiện)
2. Xác nhận tính đặc hiệu
Tính chọn lọc của phát hiện Mira-LFS được xác định bằng cách phân tích 18 chủng vi sinh vật gây bệnh phổ biến và 15 chủng Staphylococcus haemolyticus lâm sàng. Kết quả cho thấy xét nghiệm MIRA-LFS âm tính với tất cả 18 vi khuẩn gây bệnh khác và dương tính với 15 mẫu lâm sàng được xác minh của Staphylococcus haemolyticus.
(8 chủng vi khuẩn gây bệnh tiêu chuẩn và 15 chủng Streptococcus tán huyết lâm sàng đã được thử nghiệm, tương ứng)
Xét nghiệm Mira-LFS có độ chọn lọc cao và phù hợp để sàng lọc Staphylococcus haemolyticus.
3. Kiểm tra mẫu thực tế
Tổng cộng có 95 mẫu được thu thập ngẫu nhiên từ Bệnh viện Nhân dân Lianyungang thứ hai, bao gồm 35 mẫu da và mô mềm, 16 mẫu nước tiểu, 14 mẫu đờm và 30 mẫu máu.
(95 mẫu lâm sàng đã được kiểm tra bằng các phương pháp khác nhau)
Kết quả cho thấy phương pháp phát hiện phù hợp 100% với phương pháp qPCR. Ngoài ra, so với tiêu chuẩn vàng (GB/T4789. 11-2003), độ nhạy và độ đặc hiệu của xét nghiệm MIRA-LFS để xác định nhiễm trùng staphylococcus haemolytica lần lượt là 100% và 98,73%. Những kết quả này xác nhận thêm tính khả thi kỹ thuật của phương pháp trong việc phát hiện Staphylococcus haemolyticus trong các mẫu lâm sàng.
Phương pháp Mira-LFS được sử dụng để phát hiện nhanh chóng Staphylococcus haemolyticus bằng POCT, hiệu quả, chính xác, đơn giản và hiệu quả về chi phí, rất hữu ích cho các quyết định chẩn đoán và điều trị nhanh chóng.