Hệ thống RPA-CRISPR/Cas12a trong nghiên cứu này đạt được khả năng phát hiện HCMV nhanh chóng (30–40 phút), cực-nhạy (1 bản sao/μL) bằng cách nhắm mục tiêu vào gen UL123 được biểu hiện sớm-, vượt trội so với các phương pháp thông thường trong xét nghiệm mẫu lâm sàng. Cải tiến này cho phép chẩn đoán kịp thời các trường hợp nhiễm-vi rút{10}}thấp, đặc biệt ở những bệnh nhân bị suy giảm miễn dịch và nhấn mạnh tính khả thi của Chẩn đoán dựa trên CRISPR-để cải thiện việc quản lý các bệnh liên quan đến HCMV-. Tính đơn giản và hiệu quả của xét nghiệm làm nổi bật tiềm năng của nó như một công cụ-chăm sóc điểm{15}}cho các cài đặt{16}}hạn chế về tài nguyên.
Các mẫu vị trí khuếch đại RPA và lựa chọn bộ công cụ.
(A) Thiết kế mồi RPA liên quan đến vị trí của các đoạn khuếch đại. Mũi tên chỉ vị trí cơ sở từ đầu đến cuối đoạn được khuếch đại bằng mồi P1-P6.
(B) Ảnh điện di trên gel agarose của sản phẩm RPA được khuếch đại với 6 bộ mồi HCMV.
(C) Sàng lọc hiệu quả khuếch đại của bộ RPA từ các công ty khác nhau. P: Sơn lót, NC: Đối chứng âm tính.
Kết quả chỉ ra rằng bộ AmpFuture thể hiện hiệu suất khuếch đại cao nhất.
So sánh tỷ lệ dương tính của MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - Phương pháp thăm dò huỳnh quang và qPCR trong các mẫu lâm sàng.
Chúng tôi đã thu thập mẫu máu và nước tiểu từ 48 bệnh nhân lâm sàng. DNA bộ gen được chiết xuất từ các mẫu này bằng Bộ DNA bộ gen TIANamp và kết quả phát hiện UL122 được phân tích thông qua phương pháp thăm dò huỳnh quang PCR-. So sánh kết quả của chúng tôi với các chẩn đoán lâm sàng, phương pháp của chúng tôi đã xác định được 6 mẫu dương tính nhưng âm tính trong các xét nghiệm lâm sàng.
